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潮霉素B Hygromycin B穩(wěn)定轉(zhuǎn)染細胞的篩選

  潮霉素B Hygromycin B穩(wěn)定轉(zhuǎn)染細胞的篩選

  1) 轉(zhuǎn)染48h后,用含有適當(dāng)濃度的潮霉素B篩選培養(yǎng)基來傳代細胞(直接傳代或者稀釋后傳代)。

  注意:細胞處于活躍分裂狀態(tài)時抗生素的殺傷效果。則當(dāng)細胞過于稠密,其效率會降低。為了得到較好的篩選效果,將細胞稀釋至豐度不超過25%。

  2) 每隔3-4天更換含有藥物的篩選培養(yǎng)液。

  3) 篩選7天后觀察并評估細胞克隆(集落)的形成情況。集落的形成可能還需要一周或者更多的時間,這取決于宿主細胞類型,轉(zhuǎn)染,以及篩選效果。

  4) 挑取并轉(zhuǎn)移5-10個抗性克隆于35mm細胞培養(yǎng)板,繼續(xù)用含藥物的篩選培養(yǎng)液維持培養(yǎng)7天。

  5) 之后更換正常培養(yǎng)基培養(yǎng)即可。

  潮霉素B Hygromycin B時的注意事項

  1) 潮霉素B Hygromycin B的抗性基因(hyg或hph)除了來自E. Coli.之外,還發(fā)現(xiàn)于其他的菌株,包括Streptomyces hygroscopicus和Klebsiella pneumoniae。

  2) 為了您的安全和健康,請穿實驗服并戴一次性手套操作。

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