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產(chǎn)品中心
大腸桿菌化學感受態(tài)細胞表達分析

大腸桿菌化學感受態(tài)細胞表達分析

簡要描述:

大腸桿菌化學感受態(tài)細胞表達分析EPI300菌株有一個突變的trfA基因,該基因表達出的蛋白產(chǎn)物可以促進含有ori V復(fù)制子的質(zhì)粒的高拷貝擴繁,誘導液(CopyCutter Induction Solution)可以誘導trfA基因的表達。

產(chǎn)品時間:2024-07-16

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EPI300 Chemically Competent Cell

大腸桿菌化學感受態(tài)細胞

 


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貨號

產(chǎn)品名稱

規(guī)格

價格(元)

MF2297-1000UL

EPI300 Chemically Competent Cell大腸桿菌化學感受態(tài)細胞

10×100μl

429

MF2297-5000UL

EPI300 Chemically Competent Cell 大腸桿菌化學感受態(tài)細胞

50×100μl

1799


產(chǎn)品組分:

組分編號

組分名

貨號(規(guī)格)

MF2297-1000UL

MF2297-5000UL

MF2297-A

EPI300Chemically Competent Cell

10×100μl

50×100μl

MF2297-B

Control Vector puC19,10pg/μl

10μl

10μl


菌株描述

EPI300菌株有一個突變的trfA基因,該基因表達出的蛋白產(chǎn)物可以促進含有ori V復(fù)制子的質(zhì)粒的高拷貝擴繁,誘導液(CopyCutter Induction Solution)可以誘導trfA基因的表達。當含有ori V復(fù)制子質(zhì)粒的EPI300細胞在LB/2YT或SOB培養(yǎng)基中生長時,trfA基因的表達被抑制,ori V復(fù)制子質(zhì)粒的拷貝數(shù)維持在很低的水平;當在培養(yǎng)基中加入誘導液(CopyCutter Induction Solution),ori V復(fù)制子質(zhì)粒的拷貝數(shù)可維持在很高的水平,提高了質(zhì)粒產(chǎn)量。因此EPI300菌株可以降低ori V復(fù)制子質(zhì)粒的拷貝數(shù),特別適合于各種不穩(wěn)定 DNA 或毒性基因的克隆。


更多特征】:

[mcrA,Δ(mrr-hsdRMS-mcrBC)]基因型,使EPI300適合于甲基化DNA的有效克隆;

endA1的突變確保質(zhì)粒克隆的高產(chǎn)量;recA1的突變確保大分子DNA插入的穩(wěn)定性;

lacZΔM15標記的存在,使EPI300適用于藍白斑篩選;

rpsL賦予EPI300鏈mei素抗性。

EPI300菌株基因型:F – mcrA ?(mrr-hsdRMS-mcrBC) φ80dlacZ?M15 ?lacX74 recA1 endA1 araD139 ?(ara,leu)7697 galU galK λ – rpsL nupG trfA dhfr


產(chǎn)品描述

本品是大腸桿菌EPI300菌株經(jīng)特殊工藝制作所得的感受態(tài)細胞,可用于DNA的熱擊轉(zhuǎn)化。經(jīng)pUC19質(zhì)粒檢測轉(zhuǎn)化效率>3×108 cfu/μg DNA。且在-80℃能穩(wěn)定保存幾個月轉(zhuǎn)化效率不發(fā)生改變。

 

保存與運輸條件:

保存:-80℃保存,六個月有效。

運輸:干冰運輸

 

注意事項

1) 感受態(tài)細胞必須用干冰運輸。感受態(tài)細胞應(yīng)在-80℃保存,不可反復(fù)凍融且放置時間過長,否則會減低感受態(tài)細胞的轉(zhuǎn)化效率。

2) 最好在冰上融化感受態(tài)細胞。

3) 進行轉(zhuǎn)化操作時,需在相應(yīng)溫度及無菌條件下進行。

4) 轉(zhuǎn)化高濃度的質(zhì)粒可相應(yīng)減少最終用于涂板的菌量。

5) 為防止轉(zhuǎn)化實驗不成功,可保留部分連接反應(yīng)液以重新轉(zhuǎn)化,將損失降到zui低。

6) 產(chǎn)品包裝內(nèi)含載體pUC19 DNA(10pg/μl),供對照實驗用。

7) 為了您的安全和健康,請穿實驗服并戴一次性手套操作。

使用方法【所有操作均在無菌條件的標準下進行】

1) 從-80℃冰箱取出取感受態(tài)細胞,迅速置于冰浴中,5min后待菌塊融化,加入目的DNA(質(zhì)粒或連接產(chǎn)物),用手輕彈管底輕輕混勻(避免用槍吸打),冰浴靜置25min。

2) 42℃水浴熱激45s,迅速將離心管轉(zhuǎn)移到冰浴中,冰上靜置2min。此過程不要搖動離心管。

3) 向每個離心管中加700 μl無菌的2YT或LB培養(yǎng)基(不含抗生素),混勻后置于37℃ 搖床,200 rpm振蕩培養(yǎng)60min,目的使質(zhì)粒上相關(guān)的抗性標記基因表達,使菌體復(fù)蘇。

4) 低速離心收菌(比如5000rpm,1min),留取100μl左右上清,用槍輕輕吹打重懸菌塊,之后加到含所選質(zhì)粒篩選抗生素的2YT或LB固體瓊脂培養(yǎng)基上,用無菌的涂布棒將細胞均勻涂開,將平板置于室溫(或37℃)直至液體被吸收,倒置培養(yǎng),37℃培養(yǎng)過夜。如果進行藍白斑篩選,37℃培養(yǎng)至少15h。


【注意】

a)涂布用量可根據(jù)具體實驗調(diào)整。若轉(zhuǎn)化的DNA總量較多,可取少量轉(zhuǎn)化產(chǎn)物涂布平板;反之,若轉(zhuǎn)化的DNA總量較少,可取200-300 μl轉(zhuǎn)化產(chǎn)物涂布平板。若預(yù)計的克隆較少,可通過離心(5,000 rpm,1min)后吸除部分培養(yǎng)液,懸浮菌體后將其涂布于一個平板中。

b)新制備的固體培養(yǎng)基不易涂干,可將平板正置于37℃直至液體被吸收后再倒置培養(yǎng)。

c)涂布剩余的菌液可置于4℃保存,如果次日的轉(zhuǎn)化菌落數(shù)過少,可以將剩下的菌液再涂布新培養(yǎng)基進行培養(yǎng)。 


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MF2014-5ML

CopyCutter Induction Solution誘導液

5ml

 

附表1固體和液體LB培養(yǎng)基配方

組分Component

LB(液體)/升

LB(固體)/升

胰蛋白胨Tryptone

10g

10g

酵母提取物Yeast extract

5g

5g

氯化鈉NaCl

10g

10g

1N NaOH

調(diào)整pH至7.0

調(diào)整pH至7.0

瓊脂Agar

/

15g


附表2固體和液體2-YT培養(yǎng)基配方

組分Component

2YT(液體)/升

2YT(固體)/升

胰蛋白胨Tryptone

16g

16g

酵母提取物Yeast extract

10g

10g

NaCl

5g

5g

1N NaOH

調(diào)整pH至7.0

調(diào)整pH至7.0

瓊脂Agar

/

15g

 



 — —Written/Edited by V. Shallan【版權(quán)歸MKBio懋康所有】

 

上海懋康生物科技有限公司是一家涉足于生命科學和生物技術(shù)領(lǐng)域研究的試劑、儀器和實驗室消耗品與實驗服務(wù)工作,主要從事細胞生物學、植物學、分子生物學、免疫學、生物化學、蛋白組學。生物制藥與診斷試劑研發(fā)生產(chǎn)等領(lǐng)域。 本公司秉承“以人為本,以誠為信、合同守信"的經(jīng)營理念。堅持"品質(zhì)保障"的原則為廣大客戶提供優(yōu)質(zhì)產(chǎn)品。

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